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核苷酸類似物N⁴-甲基-2′-脫氧胞苷5′-三磷酸用于高GC含量 DNA的PCR擴增

采用標準的脫氧核苷三磷酸體系或體系中的dCTP部分或者全部被其N⁴甲基化類似物——N⁴甲基-2′-脫氧胞苷5′-三磷酸（N⁴me-dCTP）所代替的混合體系，用Taq DNA聚合酶進行高GC含量DNA的PCR擴增。用以上兩種反應體系來擴增一段高GC含量（GC 含量為78.9%）的DNA片段，含有N⁴me-dCTP的PCR體系擴增出了高產量的目的片段，而包含標準核苷酸的反應體系則產生了大量的非特異性擴增。在對另一段高GC含量（GC含量為 80.6%）DNA的擴增中，只有含有N⁴me-dCTP的PCR反應體系所擴增出的目的片段經凝膠純化后進行二次擴增獲得了目的產物。在一個高GC含量模板的直接PCR的比較中，含有N⁴me-dCTP的反應體系明顯地比含有各種有機添加劑的標準核苷酸體系表現(xiàn)出更好的擴增效果，據報道這些有機添加劑（二甲基亞砜，甜菜堿，乙二醇）能夠解決一些DNA二級結構研究中遇到的難題。在中等GC含量的DNA片段的PCR擴增中，檢測到核苷酸類似物在合成每一個目的擴增產物時的解鏈溫度（Tm）明顯地低于專一使用標準核苷酸合成相同擴增產物時的Tm值。

原文：

Cyntia R. Flores-Juárez, Eva González-Jasso et al, PCR amplification of GC-rich DNA regions using the nucleotide analog N ⁴ -methyl-2´-deoxycytidine 5´-triphosphate. BioTechniques 61:175-182 (October 2016).